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【Bio-protocol】细胞线粒体染色与超分辨成像
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线粒体作为细胞产能工厂,在新陈代谢中有重要作用,与细胞自噬发生,能量营养供给等密切相关。线粒体会发生分裂,融合等行为,嵴也会活跃变化。可视化线粒体动态变化有重要意义。由于线粒体的光敏感性,一般超分辨荧光显微镜强激光会使线粒体产生大量ROS而受损。Hessian-SIM(NBT,2018)具有低光毒性,可长时程观察线粒体。成像需荧光标记,Mitotracker染料可结合内嵴而标记,PK mito染料(2020, chemical science)也可标记嵴,且是目前染料中光毒性最低的。本视频介绍了细胞准备,染色到成像的过程。成像细胞需要铺在玻片上。首先是玻片准备,由于SIM需使用特定折射率玻片,本实验使用定制的蓝宝石玻片,包被多聚赖氨酸可以使细胞更加铺展。接着是细胞贴片,实验中cos-7细胞是一种贴壁平展适于成像的细胞系。然后是染色,Mitotracker染料染色15-20min,染料需洗涤,否则长时间染色细胞线粒体会膨胀。最后是SIM成像,使用活细胞工作站给细胞加热可以使细胞能够长时间保持动态的活动。结构光成像得到的图片需要用算法进行重构,重构后可以清晰地看到线粒体嵴结构及其动态变化。 出处:Bio-protocol第一届生物实验短视频大赛 作者:北京大学分子医学研究所,邢诗嘉
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