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小鼠脑立体定位注射
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定位仪经过搬动或长期不用后,使用前需先加以校验。重点是检验电极移动架各滑尺是否保持直角,可用三角板测定各滑尺所成的角度是否是直角;各衔接部与螺丝有没有松动;滑尺是否太松;检查主框两臂的平行情况;最后观察固定头的装置两侧对称程度,小框是否与主框平行。检查仪器无故障后,可进行下列校验性操作: (1)将两侧耳杆柱旋松,在主框上前后滑动,然后再按照原规定刻度装好,看两侧耳杆尖是否完全对正。 (2)取下一侧耳杆,将一侧电极移动架装好,前后左右上下移动各滑尺,使装在电极夹上的金属定位针尖正对耳杆尖的中心,记下各滑尺的刻度读数,再卸下移动架再装上,并按上法测定耳杆尖的部位,记下三个滑尺的读数,反复操作取平均数首先将放置水平的脑立体定位仪上的两个滑道,按实验的要求调节好合适的高度后。 (3)然后再用水平尺调正好两个滑道的前后、左右水平。这时再把安置在滑道上的手动微推进器按上面的刻度调节垂直。 开始实验: (1)动物麻醉:吸入式麻醉对小鼠进行麻醉 (2)小鼠头部固定:将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器,然后把一侧的耳捧推入动物的外道后,使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后,将两耳棒上的固定螺丝扭紧,在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧(鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好),这时从各个方向推压动物头部"均不会出现移动。 (3)开颅钻孔前的备皮:剪去动物头部毛,用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒,沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口,分离皮下组织,用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离,推开骨膜,暴露前囟、人字缝及矢状缝。 (4)确定标准中线:将金属定位针向下移动到矢状缝上方后,再前后移动定位针,使定位针定位到前囟。 (5)小鼠海马定位:用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点,即为海马的平面位置,然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。 (6)注射药物:小鼠海马则位于该圆孔下2 mm,将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上,操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。
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