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二代测序 2:Illumina NGS 样品制备 - Eric Chow (UCSF)
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二代测序允许快速且经济地对 DNA 样本进行测序。了解二代测序的工作原理并获取有关准备和运行样品的提示。 在过去的十年中,DNA 测序的效率发生了惊人的变化。使用传统的 Sanger 测序,人类基因组计划耗时 20 年,耗资 30 亿美元。当前的二代测序方法允许在 48 小时内以 1000 美元对人类基因组进行测序!在本次演讲中,Eric Chow 解释了二代测序背后的化学原理,并描述了二代测序仪如何检测和显示结果。最常用的 Illumina 测序仪是基于图像的,可检测荧光标记核苷酸的添加。 Chow 还描述了两种不同的二代测序技术,它们具有更长的读取时间等优点,但也有更高的错误率等缺点。 Chow 以对二代测序的医学应用(例如侵入性小得多的产前检测或癌症检测)的一些见解结束了演讲。 在他的第二次演讲中,Chow 讨论了 Illumina NGS 样品制备。他介绍了 DNA 和 RNA 制备、基于微珠(Ampure 或 SPRI)的清理以及样品定量和质量控制。 在两个简短的操作视频中,Chow 就使用磁珠纯化 DNA 样品和使用安捷伦生物分析仪确定核酸样品的质量提供了建议。 00:00 - 开始 00:36 - 二代测序回顾 02:13 - DNA 文库制备 07:17 - RNA文库制备 14:26 - 基于珠子的清理 18:22 - 样品量化和质量控制 演讲者简介: Eric Chow 是加州大学旧金山分校生物化学和生物物理系的助理教授和先进技术中心 (CAT) 的主任。 CAT 为希望使用二代测序技术的 UCSF 实验室提供资源,Chow 的研究计划致力于开发 NGS 在病原体诊断中的新应用。 Chow 在加州大学伯克利分校获得分子生物学学士学位,在加州大学旧金山分校获得生物化学博士学位。
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2)二代测序 (NGS) - 样品制备
RNA测序工作原理
3)二代测序 (NGS) - 覆盖率和样本质量控制
4)二代测序 (NGS) - 数据分析
二代测序 3:用磁珠纯化 DNA 样本 - Eric Chow (UCSF)
二代测序 4:使用安捷伦生物分析仪检查核酸 - Eric Chow (UCSF)
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