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【维真生物 #分子克隆#】第13期—qPCR原理和引物设计
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qPCR原理 PCR是一种链式反应,即每次扩增后的产物可作为下次扩增的底物而在qPCR中,每次扩增后产物的含量均可以通过对应的荧光量表示,因此可通过设定一个荧光量闯值,统计达到该阙值所对应的PCR扩增数 (循环数,Ct值) ,来计算待测样品中靶基因的含量。 待测样品中靶基因的含量 (拷贝数) 越高,达到值所对应Ct值越小,反之,待测样品中靶基因的拷贝数越低,达到闯值所对应Ct值越大因此利用已知起始拷贝数的标准品制作标准曲线,横坐标代表Ct值,纵坐标代表起始拷贝数的对数,利用获得待测样品的Ct值,即可从标准曲线上得出样品中靶基因的拷贝数。
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