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【短视频大赛】离心后肝细胞传代
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一、视频摘要 实验原理:细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种储存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各类实验的必通过程。 目的:进行传代之后能为后续实验提供大量所需细胞。 结果:肝细胞每次传代成功,都为后续实验提供更多细胞,能开展更多实验。 二、关键词 肝细胞、离心、传代 三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器 1.样品信息 BRL-3A肝细胞 2.试剂和耗材 1X PBS缓冲液(细胞培养) 胰酶 DMEM培养基 3.仪器和软件 离心机 二氧化碳培养箱 四、实验操作 将肝细胞用胰酶消化下来后进行离心,先在T25中加入新的4mL培养基,再加入新的1mL培养基于离心管中混悬,吹打混匀,将离心管细胞液打入T25中,多次吹打,平铺T25,使细胞加入时均匀铺于T25一面。标记好细胞名、时间、代数、自己姓名后将T25放入二氧化碳培养箱。 五、注意事项 1)传代培养时要注意无菌操作, 所有操作要尽量靠近酒精灯火焰, 手不能在瓶口上方操作,以免污染气体进入瓶内。要防止细胞之间的交叉污染, 每次最好只进行一种细胞的操作,每一种细胞使用一套器材。每种试剂使用一个移液管,培养用液要严格分开。 2)坚持每天观察细胞,生长致密时即可传代。如发现有污染迹象,应丢弃污染的细胞。 3)细胞消化时要注意观察,不要消化过度,否则细胞不宜存活。吹打细胞时,确保瓶壁所有地方均吹打到,吹打时动作要轻柔,不要用力过大,以防细胞破碎。 4)培养箱不要反复多次开关,以免影响温度的稳定和增加污染的机率。 出处:Bio-protocol第三届生物实验短视频大赛 作者:浙江中医药大学药学院,许月龄
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