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【机读机译|文献速递】基于共识序列+组合突变优化草酸脱羧酶
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原文链接:https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.05.06.592502v1 省流版文稿: 研究者在该研究中使用了基于共识的方法,这是蛋白质工程中公认的一种方法,用以增强枯草芽孢杆菌来源的草酸脱羧酶(OxDC)的稳定性和活性。这种方法涉及将蛋白质的特定残基还原到它们的祖先氨基酸,这是基于多序列比对的共识分析。通过识别不同序列中每个位置最常出现的氨基酸,研究者可以确定哪些突变可能导致蛋白质性能的提高。这种技术在识别增加酶稳定性和催化效率的突变方面发挥了关键作用,特别是在传统OxDC效果较差的生理pH条件下。 在他们的工作流程中,研究者根据序列分析的共识百分比选择了一组突变,然后使用定点突变方法将这些突变引入OxDC序列。接下来是表达和纯化突变蛋白,然后在不同条件下测试其活性和稳定性。基于共识的方法允许针对性和理性的设计蛋白质变体,成功地识别了在所需条件下增强酶功能的有益突变。
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