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【核酸-蛋白互作专题】第3期 酵母单杂交
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酵母单杂交介绍 酵母单杂交(Yeast one-hybrid,Y1H) 是由酵母双杂交技术发展而来的一种研究蛋白和特定DNA序列相互作用的技术。通过对报告基因的检测.分析DNA与蛋白之间的相互作用,多用于真核细胞内基因表达调控机制的研究。 --------------------------------- 酵母单杂交原理 酵母杂交系统的建立得益于对真核细胞转录起始过程的认识真核生物的转录因子通常是由DNA结合域 (BD) 和转录激活域 (AD) 两部分组成,两个组分功能相互独立,BD负责与启动子上游激活序列(UAS)结合,此时AD激活UAS下游基因的转录。单独的BD无激活转录的功能,即使结合至UAS也无法激活转录,单独的AD无法靶向富集到UAS附近,同样无法激活下游基因转录,当BD和AD结合才具有完整的转录激活因子的功能。基于转录因子的作用机制,科研人员将携带目的DNA序列和报告基因的载体 (bait) 以及表达待测转录因子 (TF) 和GAL4-AD融合蛋白的载体 (prey转入酵母中。若TF能与目的DNA序列结合,则GAL4-AD靶向富集到报告基因上游,激活报告基因的表达。因此可以通过检测报告基因的表达,验证TF是否与DNA序列存在互作。
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