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3.33 CRISPR_Cas9技术如何对真核基因组进行编辑?
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CRISPR/Cas9技术如何对真核基因组进行编辑? CRISPR/Cas9系统通过引导RNA (gRNA) 与Cas9蛋白质的复合体来实现对真核生物基因组的精确编辑。gRNA是专门设计的,能够与基因组中特定的目标序列互补配对。这个目标序列通常紧邻一个被称为原始配对序列(PAM)的短DNA序列。PAM序列是Cas9识别和结合DNA所必需的,通常位于目标DNA序列上游3-4个碱基。 一旦gRNA将Cas9蛋白质引导到正确的位置,Cas9就会在PAM序列附近制造一个双链断裂(DSB)。这个断裂激活了细胞内部的DNA修复机制,有两种主要的修复路径可以修复这种断裂: 1.非同源末端连接(NHEJ):这是一种快速但易出错的修复过程。在没有提供任何修复模板或供体DNA的情况下,细胞会尝试直接连接这些断裂的末端。这种连接过程往往不够精确,可能在DNA断裂处引入插入或缺失(indels),从而导致目标基因的功能失活或“敲除”。 2.同源重组(HDR): 这是一种高保真度的修复机制。如果科学家们提供了一个含有期望DNA序列的修复模板或供体DNA,细胞可以利用这个模板来精确地修复DSB。通过HDR,可以在特定位置引入特定的突变,或者插入一个全新的基因序列,实现目标基因的“敲入”。 通过选择性地利用这两种不同的修复机制,科学家可以设计实验来敲除、替换或插入特定基因,从而研究它们的功能或开发治疗遗传疾病的新方法。
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CRISPR-Cas9技术基础知识50问-第1问
CRISPR-Cas9技术基础知识50问-第3问
CRISPR-Cas9技术基础知识50问-第7问
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CRISPR-Cas9技术基础知识50问-第11问
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CRISPR-Cas9技术基础知识50问-第4问
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