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【详解】噬菌体展示Ab技术的5个步骤
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一般来说,噬菌体展示抗体技术有以下5个步骤: 步骤1:构建噬菌体展示库 使用重组DNA技术将免疫动物的B细胞cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因被插入到多个噬菌体的外壳蛋白的基因中,使该蛋白可以表达在噬菌体颗粒的外表面,而这些分离的噬菌体只展示一种蛋白、肽或抗体。这些噬菌体的集合即为库,如抗体噬菌体库、蛋白质噬菌体库或随机噬菌体库。 步骤2:结合 这些库暴露于选定的目标(抗原),只有一部分噬菌体会与目标结合。这些目标可以是固定的蛋白(抗原)、细胞表面蛋白或组织细胞表面蛋白等。其余则不会与目标结合。 步骤3:洗涤 未结合的噬菌体通过洗涤被洗涤缓冲液冲走,只留下那些对目标有良好亲和力的噬菌体。 步骤4:洗脱 使用洗脱缓冲液洗脱回收对目标有亲和力的噬菌体。 步骤5:放大 展示特异性的洗脱噬菌体被用来感染新的宿主细胞进行扩增,或直接进行细菌感染和扩增回收的噬菌体。
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6分钟搞懂噬菌体展示技术
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