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荧光共振能量转移(FRET)的优缺点和实验过程中的注意事项有哪些?
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http://www.youtube.com 荧光共振能量转移(FRET)是一种物理现象,发生在两个荧光发色基团足够靠近时。当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态,通过偶极子相互作用,能量向邻近的受体分子转移。这一过程要求供体与受体在合适的距离(通常为1-10nm),且供体的发射光谱与受体的吸收光谱有一定的重叠。FRET通过分子间的电偶极相互作用,将供体激发态能量转移到受体激发态,可能导致供体荧光强度降低,而受体发射更强或本身特征荧光,也可能不发荧光(荧光猝灭),同时伴随着荧光寿命的相应缩短或延长。FRET的原理对空间位置的改变非常灵敏,两个发色基团之间的能量转换效率与它们之间的空间距离的六次方成反比。例如,使用绿色荧光蛋白(GFP)的两个突变体CFP和YFP,当CFP的发射光谱与YFP的吸收光谱有相当的重叠,且它们足够接近时,用CFP的吸收波长激发,CFP的发色基团将会把能量高效率地共振转移至YFP的发色基团上,导致CFP的发射荧光减弱或消失,主要发射YFP的荧光。FRET技术在生物学研究中被广泛应用,用于研究生物分子的相互作用和构象变化等。通过将待检测的蛋白偶联上供体和受体荧光蛋白,可以定量分析供体蓝光被转化为受体黄光的效率变化,从而检测出两个蛋白间的距离变化,表征蛋白质分子间的相互作用和构象变化。
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