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你们要的敲科学敲高效——转膜+考染整个实验过程只需半个小时
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转膜和考染实验操作步骤: (1)取出电泳后的制作好的胶,用刮胶版去掉样品孔上的凝胶。 (2)将配置好的转膜缓冲液倒入转膜槽中,将海绵和滤纸浸泡一分钟,拿出放在转印夹面板上。注意:NC膜无正反面区分,如果使用PVDF膜的话,需要甲醇预先活化一分钟。 三明治的顺序是面板(正极)-海绵-三层滤纸-NC膜-胶-滤纸-海绵-面板(负极) (3)用刮胶板将凝胶与玻璃板分离,将凝胶取出放在滤纸上,确保胶与膜完全贴合并处于滤纸中间位置。注意:胶无正反面,胶放到负极黑色面板上 (4)用镊子将NC膜放在转膜液中润湿即可,盖在凝胶上。 (5)用乙醇进行润湿,再拿滚轮赶出胶与膜之间的气泡(不会有气泡产生),盖上3层滤纸、一块海绵,扣好三明治转印夹,将其垂直插入缓冲液槽中,确定转印夹黑色面对应于黑色电极; (6)盖好转膜槽盖子,接通电源,恒压120v转膜时间20min。 (7)转膜之后我们采用丽春红进行染色,看蛋白条带效果 (8)转完膜以后,这个残胶用即蓝染色液染色,胶上无任何蛋白残留
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