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1.14 如何使用基因敲除细胞来做药物靶点发现?
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如何使用基因敲除细胞来做药物靶点发现? 基因敲除是一种常用的功能基因组学方法,可以通过去除或“敲除”目标基因来研究其在细胞或生物体中的功能。使用基因敲除细胞来做药物靶点发现的一般步骤如下: 1.确定研究对象:首先需要确定要研究的疾病或生物过程,并确定与之相关的靶点基因。可以使用文献研究、基因组学、转录组学等方法进行筛选和鉴定。 2.设计合适的sgRNA:在敲除目标基因的过程中,需要使用合适的sgRNA(单向导RNA)来指导Cas9核酸酶切割目标基因。通常使用在线工具(如CRISPOR)或基因编辑实验室来设计和验证sgRNA。 3.转染细胞:将合适的sgRNA和Cas9蛋白质导入目标细胞中,观察基因敲除效率。可以使用化学转染、电转染、病毒载体等方法进行转染. 4.诱导药物敏感性:通过高通量筛选方法,如MTT、ATP检测等方法,检测基因敲除细胞系对各种药物的敏感性和反应。 5.确定药物靶点:通过比较敲除和对照细胞系的药物敏感性,筛选出具有高选择性和效力的药物靶点。同时,需要进行基因组学和转录组学分析,确定敲除细胞系中的信号通路和生物过程的变化。 6.验证药物靶点:验证药物靶点的生物学和药理学效应,例如使用基因重组、小分子抑制剂、抗体等方法,验证药物靶点的作用机制和效果。 总的来说,使用基因敲除细胞来做药物靶点发现需要涉及到许多步骤和实验技术,需要经验丰富的研究人员和复杂的实验设计。
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1.13 基因敲除实验中常用的gRNA设计网站/软件有哪些?
1.25 一旦确定某个基因需要基因编辑,我们如何选择敲除还是敲低
1.10 目标基因属于必需基因,那如何进行基因敲除?
1.11 基因敲除实验中如何优化细胞转染的条件?
1.16 为什么使用RNP方法敲除iPSC细胞?
1.19 如何将高通量基因敲除技术用于药物靶点筛选?
1.1如何评估基因编辑的效果?
2.1 文献分享:利用人类冠状病毒蛋白相互作用和基于CRISPR的基因筛选技术快速验证潜在药物靶点
1.5 gRNA序列应该如何设计?
3.1 什么是基因打靶技术?
1.8 如何确保目标基因在所选细胞系中存在并可以进行敲除?
1.2在基因敲除实验前需要做哪些准备?
1.17 高通量基因敲除技术如何应用于病毒-细胞相互作用的基础研究?
6.7 细胞单克隆筛选时,如何保证96孔板细胞培养板中的每一个孔只有单克隆?
1.18 基因敲除技术如何与蛋白质组技术相结合,研究基因功能和生物标志物发现?
2.2 文献分享:全基因组规模的敲除筛选在人类细胞中的应用
3.31 稳转细胞系的构建常用方法有哪些?有何区别?
3.25 基因敲除细胞如何通过质谱检测和WB检测来评价其敲除效率,这两种方法有什么区别?
3.15 为什么RNP的基因敲除方法可以实现高通量?
3.4 细胞基因组DNA的修复机制是什么?
1.28 基因编辑技术在一个细胞上可以同时进行多少个基因改造吗?同时敲除和逐步敲除各有什么优缺点?
大师姐优选:高质量基因敲除多克隆细胞池4周交付6666元!
1.12 如何采用蛋白质组学技术来检测基因敲除脱靶效应?
3.32 基因编辑涉及到的基因敲除,敲低和过表达分别可以用哪些方法?
1.31 RT-PCR是否可以作为siRNA基因敲低效率的评估?
1.33 为什么WB实验不完全适用于KO细胞的敲除效率评估(1)
1.4 CRISPR实验如何选择递送体系?
3.16 为什么针对ipsc细胞的基因敲除最适合采用RNP方法?
1.15 RNP基因敲除方法如何实现高通量基因敲除?
1.23 在哪些基础研究领域需要用到大规模的基因敲除?
6.9 基因敲除所采用的RNP通过电转后,细胞多久可以换液?
6.2 细胞培养中为什么不先将胰酶加热到37度再使用?
7.2 质粒转染细胞后,如何确定该过程的转染效率?
3.2 限制酶为什么不能对哺乳动物基因编辑?
3.27 基因敲除单克隆与敲除细胞池在应用上有什么区别?
3.21 如何通过定量蛋白质组学技术分析KO细胞的敲除效率?
1.32 为什么qPCR不完全适用于KO细胞的敲除效率评价?
6.6 使用抗性筛选阳性克隆细胞时,为什么要使细胞的汇合度在20-30%的低密度状态?
3.6 ZFN技术的局限性
7.3 转染细胞的质粒为什么要去除内毒素?