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7.3 转染细胞的质粒为什么要去除内毒素?
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转染细胞的质粒为什么要去除内毒素? 内毒素,也称为脂多糖(LPS),是革兰阴性细菌的一个主要成分,具有很强的生物活性。在质粒转染细胞的过程中,如果质粒含有内毒素,可能会对实验和细胞产生影响。 1.影响细胞生理状态:内毒素可以通过激活哺乳动物细胞上的Toll样受体4(TLR4)来诱导炎症反应,导致细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6等的产生。这种炎症反应会改变细胞的生理状态,可能导致细胞生长缓慢,甚至死亡。此外,这种炎症反应也可能影响转染效率,因为细胞在应对炎症反应的同时,可能无法有效地表达转染进来的基因。 2.干扰实验结果:内毒素的存在可能会对实验结果产生干扰。例如,如果你的实验目标是研究细胞的免疫反应或信号通路等,内毒素的存在可能会激发细胞的免疫反应,使得你无法准确判断结果是由转染的基因引起,还是由内毒素引起。 3.影响后续应用:如果转染后的细胞用于生成蛋白质或者用于体内实验,内毒素的存在可能会影响蛋白质的功能或者引发体内的免疫反应。例如,在药物开发中,如果制备的蛋白质药物中含有内毒素,可能会引发患者的免疫反应,影响药物的安全性和有效性。 因此,在进行质粒转染前,通常需要使用内毒素去除试剂将质粒中的内毒素去除,以保证实验的准确性和细胞的健康状态。
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7.5 电穿孔转染质粒时,为什么会出现转染后细胞不贴壁或者死亡情况?
7.4 如何祛除在细胞转染实验中使用质粒的内毒素?
6.10 质粒用于细胞转染效率太低怎么办?
专业操作:质粒DNA转染实验
1.8 如何确保目标基因在所选细胞系中存在并可以进行敲除?
7.1 有哪些措施可以提高质粒的细胞转染效率?
7.2 质粒转染细胞后,如何确定该过程的转染效率?
1.1如何评估基因编辑的效果?
6.5 细胞进行质粒转染时为什么要使转染时细胞的汇合度保持在50-80%?
6.7 细胞单克隆筛选时,如何保证96孔板细胞培养板中的每一个孔只有单克隆?
1.11 基因敲除实验中如何优化细胞转染的条件?
1.14 如何使用基因敲除细胞来做药物靶点发现?
3.16 为什么针对ipsc细胞的基因敲除最适合采用RNP方法?
7.6 相同转染条件下,为什么逆向脂质体转染后的细胞状态比正向脂质体转染的状态差很多?
3.1 什么是基因打靶技术?
6.2 细胞培养中为什么不先将胰酶加热到37度再使用?
6.6 使用抗性筛选阳性克隆细胞时,为什么要使细胞的汇合度在20-30%的低密度状态?
3.32 基因编辑涉及到的基因敲除,敲低和过表达分别可以用哪些方法?
1.16 为什么使用RNP方法敲除iPSC细胞?
1.15 RNP基因敲除方法如何实现高通量基因敲除?
6.8 细胞进行脂质体转染试剂转染时,为什么不建议马上加抗生素?
3.37 单链sgRNA相比于crRNA和tracrRNA双链体的优势
3.26 sgRNA与shRNA,siRNA作用原理有啥区别?
3.36 化学合成的sgRNA与体外转录sgRNA的区别?
1.17 高通量基因敲除技术如何应用于病毒-细胞相互作用的基础研究?
3.6 ZFN技术的局限性
1.34 为什么WB实验不完全适用于KO细胞的敲除效率评估(2)
3.4 细胞基因组DNA的修复机制是什么?
1.6 CRISPR/Cas9系统中RNA引导序列使用合成sgRNA和crRNA:tracrRNA双链体有什么不同?
3.31 稳转细胞系的构建常用方法有哪些?有何区别?
3.27 基因敲除单克隆与敲除细胞池在应用上有什么区别?
1.13 基因敲除实验中常用的gRNA设计网站/软件有哪些?
6.4 更换抗生素的品牌,为什么还需要测试待筛选细胞的抗性曲线?
3.2 限制酶为什么不能对哺乳动物基因编辑?
1.19 如何将高通量基因敲除技术用于药物靶点筛选?
3.25 基因敲除细胞如何通过质谱检测和WB检测来评价其敲除效率,这两种方法有什么区别?
1.4 CRISPR实验如何选择递送体系?
4.2 趣味科普:人体内的免疫细胞与免疫机制
1.27 为什么你的KO细胞通过蛋白质组学质谱检测出现靶蛋白的残留?是WB检测方法的问题,还是细胞系的问题?
3.3 为什么ZFN可以进行基因编辑?