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7.4 如何祛除在细胞转染实验中使用质粒的内毒素?
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如何祛除在细胞转染实验中使用质粒的内毒素? 在进行细胞转染实验时,使用的质粒如果含有内毒素,可能会影响实验结果和细胞生理状态。因此,我们需要在实验前将内毒素去除。以下是一些常用的去除内毒素的方法: 1.使用专门的内毒素去除试剂盒:市面上有很多种内毒素去除试剂盒,这些试剂盒通常利用特定的树脂或者磁珠,通过结合内毒素,从而将其从溶液中去除。这种方法操作简单,效率高,是实验室中常用的方法。使用时只需要按照说明书的步骤操作即可。应粉丝技术咨询的需求,大师姐推出“大师姐优选”合集,推荐大师姐基因编辑实验中常用的高效试剂厂家及货号。 2.使用内毒素低结合塑料器皿:一些塑料器皿表面可以吸附内毒素,因此使用这种器皿可以在一定程度上减少内毒素的浓度。例如,有些公司会出售专门的内毒素低吸附塑料试管和离心管,用这些器皿来处理和存储样品,可以减少内毒素的污染。 3.使用超离心和超滤:这种方法通过物理方式将内毒素从溶液中去除。超滤是利用分子量截止膜来分离溶液中的大分子和小分子,因为内毒素的分子量通常较小,所以可以被滤掉。超离心则是利用离心力将溶液中的大分子和小分子分离。这两种方法都需要专门的设备,且操作复杂。 4.使用酚-氯仿提取:这是一个传统的去除内毒素的方法。首先,将样品与酚-氯仿混合,经过离心后,样品会分为水相和有机相两层。DNA会留在水相中,而内毒素则会被有机相吸附。然后取出水相,就可以得到无内毒素的DNA。这种方法操作复杂,并且酚和氯仿都是有毒的化学品,需要在通风柜中操作。此外,这种方法也可能影响到DNA的质量。 5. 使用洗脱缓冲液:在某些情况下,可以通过改变洗脱缓冲液的pH值,使得内毒素不能与DNA结合,从而达到去除内毒素的目的。例如,可以使用pH 8.0-8.5的Tris-EDTA(TE)缓冲液来洗脱DNA。这种方法简单易行,但可能不适用于所有类型的内毒素。 以上就是一些常见的去除内毒素的方法,具体选择哪种方法需要根据实验条件和需求来决定。
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