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文献汇报-2024.09(曾颖周)
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原文链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35653857/#full-view-affiliation-3 高度灵敏和特异的DNA甲基化检测对癌症的早期诊断和治疗至关重要。在此,我们提出了一种新型的无亚硫酸盐PCR检测方法,基于GlaI甲基化特异性切割和末端转移酶(TdT)延伸,用于高灵敏度和特异性检测甲基化DNA,称为GlaI-TdT甲基化PCR。在GlaI-TdT甲基化PCR检测中,首先由GlaI特异性识别并切割甲基化的CpG位点,产生带有特定游离3'末端的产物。该游离3'末端可以进一步由TdT延伸,并作为后续定量PCR的模板。GlaI-TdT甲基化PCR的特异性依赖于GlaI对甲基化的特异性识别以及TdT延伸的poly-T序列的存在。该方法对甲基化DNA的灵敏度可达到每反应10拷贝,在1万拷贝未甲基化背景下依然有效。使用结直肠癌组织样本评估了GlaI-TdT甲基化PCR的检测性能,结果与标准亚硫酸盐-PCR测序高度一致。基于其高灵敏度、高特异性、简单便捷的特点,GlaI-TdT甲基化PCR有望成为一种前景广阔、可靠的无亚硫酸盐DNA甲基化检测方法。
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