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1.27 为什么你的KO细胞通过蛋白质组学质谱检测出现靶蛋白的残留?是WB检测方法的问题,还是细胞系的问题?
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为什么你的KO细胞通过蛋白质组学质谱检测出现靶蛋白的残留?是WB检测方法的问题,还是细胞系的问题? KO细胞(基因敲除细胞)通过蛋白质组学质谱检测出现靶蛋白残留的原因可能有多种,以下是一些建议性的解释: 1. WB检测方法的问题:Western Blot(WB)检测方法可能会出现一定的误差。这些误差可能源于抗体的特异性不足、蛋白质降解、非特异性结合等。为了确保检测结果的准确性,请确保使用高特异性抗体,并且遵循正确的实验操作流程。 2. 细胞系的问题:有时候,基因敲除并不是完全的,可能会有部分基因没有被完全敲除或者基因敲除效果不稳定。此外,细胞内可能存在某些补偿机制,如同源蛋白表达、基因重组等,这些机制可能导致目的蛋白残留。 3. 实验操作误差:在进行基因敲除实验时,操作者的误差可能导致实验结果出现偏差。请确保严格按照实验操作流程进行操作。 4. 基因敲除效率不足:有时候,使用的基因编辑技术(如CRISPR/Cas9)可能无法完全敲除目标基因。可以尝试改进实验设计,使用多个sgRNA靶向不同区域,或者使用其他基因编辑技术。 为了解决这个问题,建议从以下几方面入手: 1. 优化WB检测方法,确保抗体的特异性和实验操作的准确性。 2. 检查细胞系的基因敲除效果,可以通过PCR、DNA测序等方法进行验证。 3. 重新设计基因敲除实验,提高基因敲除效率。 4. 探究细胞内的补偿机制,了解目的蛋白残留的原因。
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1.28 基因编辑技术在一个细胞上可以同时进行多少个基因改造吗?同时敲除和逐步敲除各有什么优缺点?
3.21 如何通过定量蛋白质组学技术分析KO细胞的敲除效率?
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1.36 为什么WB实验不完全适用于KO细胞的敲除效率评估(4)
3.18 如何进行细胞的支原体检测?
7.4 如何祛除在细胞转染实验中使用质粒的内毒素?
1.17 高通量基因敲除技术如何应用于病毒-细胞相互作用的基础研究?
1.8 如何确保目标基因在所选细胞系中存在并可以进行敲除?
3.19 为什么针对KO细胞系需要进行STR鉴定?
5.6 谱度众合正式加入“杞梓计划“!!
1.25 一旦确定某个基因需要基因编辑,我们如何选择敲除还是敲低
3.18 如何进行细胞的支原体检测?
1.14 如何使用基因敲除细胞来做药物靶点发现?
CRISPR大师姐 直播预告:2024年8月9日下午14:00-12日上午11:00 第五届全国肿瘤细胞生物学年会!敬请期待!
7.3 转染细胞的质粒为什么要去除内毒素?
6.2 细胞培养中为什么不先将胰酶加热到37度再使用?
4.1 趣味科普:细胞内的核酸分子和蛋白质分子