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细胞基因疗法之十:LV载体临床和商业分析
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生产CAR-T细胞疗法的主要步骤包括最初分离和富集T细胞、T细胞活化、CAR基因转移、体外CAR-T细胞扩增,以及最后的末端工艺和冷冻保存。目前有多种方法用于T细胞修饰,包括病毒载体转导(如RV、LV等)及非病毒载体转染(转座子转染、电穿孔等技术等),大多数研发项目采用病毒载体转导,整个制造周期一般需要2-4周。慢病毒本质上是逆转录病毒中的一类,一般潜伏期较长。RV和LV都会半随机地在宿主细胞基因组中整合,从而具有因插入突变和调控失调的风险;LV作为替代RV的载体,保留了其高表达效率和长表达时间的优点,同时还具备感染能力提升巨大,可穿透核膜,能整合进非分裂细胞的优势。同AAV载体类似,LV的扩大化生产同样既可以通过扩展方法,也可以通过采用悬浮培养系统实现,后者比贴壁细胞更容易放大;转染方式同样分为瞬时转染和稳定转染,相较于瞬时转染生产,稳定的慢病毒生产才是基因治疗的最佳选择。 LV的构建基于野生型HIV-1病毒(双链RNA病毒)。为了避免有复制能力病毒(RCV)的产生,在构建HIV-1型病毒载体时一般将HIV-1基因组分装于几个质粒载体中,再共转染细胞,然后获得只有一次感染能力而无复制能力的HIV-1载体颗粒。到目前为止,慢病毒载体的设计经历第一代到第三代的变迁,充分降低了同源重组产生有复制能力病毒的可能。最新的载体与野生型HIV-1序列相似性低至4.8%。 慢病毒的大规模下游处理的方式:基于膜和色谱的技术。这些不同的过程步骤的组合是可变的。一般DSP主要包括三个阶段:1)从粗制或澄清细胞培养物中初步纯化捕获目标载体,并消除主要污染物;2)中间纯化处于捕获和精纯阶段之间,主要去除特定的杂质;3)最后是精纯,旨在去除痕量污染物和杂质,以适合制剂的形式产出活性产品。 侵染过程:慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂。应用的主要疾病:β-地中海贫血、镰状细胞贫血、Wiskott-Aldrich综合征、多发性骨髓瘤、实体瘤、COVID-19。 原材料成本拆分:在CF10和HF的情况下,USP一次性组件成本占主导地位(,而pDNA在可扩展的反应器中的成本占比最高。此外在生产1000剂/年时,反应器生产下pDNA成本对每剂COG的占比为13–19%,而当生产10,000剂量每年时,这一占比提升到15-28%。减少质粒成本消耗通常需要采用无质粒的稳定生产细胞。 慢病毒载体LV上游生产滴度:根据细胞培养技术选择和工艺阶段的要求,设备每年最多可运行330天,允许每年关闭两次。批次每年的最大数量为30个。 考虑潜在适应症对病毒载体的总需求,若以每年20批计算,1个2000L悬浮生物反应器即可满足目前现有的需求,而2000L悬浮生物反应器相对少见,目前普遍使用以固定床生物反应器为主,每年生产20批,计算每年约需要250台的固定床生物反应器。长期来看若以假设的患者渗透率计算,我们认为LV未来产能大概率可满足商业化需求。
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细胞基因疗法之十三:药明生基和金斯瑞生物
细胞基因疗法之七:病毒载体放大培养
细胞基因疗法之九:AAV载体临床和商业分析
细胞基因疗法之五:病毒载体临床概览
细胞基因疗法之三:研发和生产外包
细胞基因疗法之十四:博腾生物和和元生物
细胞基因疗法之二:临床布局
细胞基因疗法之六:病毒载体生产表达
细胞基因疗法之四:CDMO外包的必要性
细胞基因疗法之八:空壳检测的难度
细胞疗法之二:前景广阔、疗效良好、生存获益
细胞基因疗法之十二:Thermo Fisher和Oxford Biomedica
细胞基因疗法之十一:Catalent和Lonza
细胞基因疗法之一:初露峥嵘
细胞疗法之五:新技术开发方向
细胞疗法之一:新起步的颠覆性技术,具有治愈潜力
细胞疗法之四:现有产品局限性
全球首款TCR-T细胞疗法获批上市!国内17家企业蓄势待发
细胞疗法之六:如何建立行业壁垒
细胞疗法之三:产品竞争格局
生物制药产业链之七:细胞与基因治疗:持续高景气的细分领域赛道
CAR-T细胞治疗从研发到生产流程的解决方案
中国肿瘤创新药之十: IV期驱动基因阳性非小细胞肺癌
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2022年医疗大健康趋势预测之十:主动健康
中国创新药时代之四:ADC、双抗、CAR-T 细胞治疗概览
中国肿瘤创新药之十一: IV期无驱动基因、非鳞癌非小细胞肺癌
风险与创新同行之十九:细胞基因治疗技术平台差异化创新
抗体偶联药物之十:全球第一款第二代ADC药物Adcetris
CAR-T治疗之一:概念
风险与创新同行之十:手术机器人差异化创新
中国肿瘤创新药之三十一:异基因造血干细胞移植
心血管疾病分析之八:三尖瓣国内三大原创技术含金量高,未来可期
软性内窥镜之十:富士、宾得在技术和成本处寻求突破
小分子创新药之三:科学原理和细分赛道
抗体偶联药物之一:靶向杀伤肿瘤细胞的生物导弹
CAR-T治疗之三:嵌合抗原受体(CARs)的分类和迭代
心血管疾病分析之五:冠脉精准PCI、可吸收支架、冲击波球囊
2022年国民健康洞察报告之十:心理观念、行为、消费习惯
CAR-T治疗之二:嵌合抗原受体(CARs)的组成